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掃描電鏡觀察生物樣品時(shí)需要注意哪些問題?

日期:2023-05-26

觀察生物樣品時(shí),使用掃描電鏡(SEM)需要注意以下問題:

樣品固定和處理:生物樣品在SEM觀察前需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)墓潭ê吞幚?,以保持其形態(tài)和結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。常見的處理方法包括化學(xué)固定、冷凍固定、凍干等,具體方法應(yīng)根據(jù)樣品的性質(zhì)和研究目的來選擇。

去除水分:SEM觀察需要在真空或低壓環(huán)境下進(jìn)行,因此生物樣品中的水分需要被去除。常見的方法包括冷凍干燥(凍脫水)或使用無水溶劑進(jìn)行干燥。

導(dǎo)電性增強(qiáng):生物樣品通常具有較差的導(dǎo)電性,因此需要在SEM觀察前增強(qiáng)其導(dǎo)電性。這可以通過金屬噴涂、碳噴涂或金屬蒸鍍等方法來實(shí)現(xiàn),以形成導(dǎo)電的表面。

選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ骶嚯x和加速電壓:SEM的工作距離和加速電壓對(duì)于生物樣品的觀察至關(guān)重要。適當(dāng)?shù)墓ぷ骶嚯x和加速電壓可以幫助獲得清晰的圖像,并避免樣品受到電子束的熱損傷。

防止輻照損傷:電子束輻照可能會(huì)對(duì)生物樣品造成損傷,因此需要控制電子束的掃描時(shí)間和電子束的功率。盡量選擇低電流和較短的掃描時(shí)間,以減少樣品的輻照損傷。

選擇合適的檢測(cè)器:SEM常用的檢測(cè)器包括二次電子檢測(cè)器(SE)和反射電子檢測(cè)器(BSE)。根據(jù)需要觀察的樣品特性和細(xì)節(jié),選擇合適的檢測(cè)器以獲得高質(zhì)量的圖像對(duì)比度和細(xì)節(jié)。

避免圖像偽影:在觀察生物樣品時(shí),應(yīng)注意避免圖像偽影的產(chǎn)生。這可能由于樣品表面的充電效應(yīng)、水分殘留或不正確的樣品制備導(dǎo)致。在樣品制備和SEM操作過程中,應(yīng)注意減少充電效應(yīng)和水分殘留,以獲得更準(zhǔn)確的圖像。

優(yōu)化參數(shù)和實(shí)驗(yàn)條件:根據(jù)具體樣品和觀察需求,不斷優(yōu)化SEM的參數(shù)和實(shí)驗(yàn)條件。

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作者:澤攸科技


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